تشخیص سریع باکتریهای مولد بیماری تب مالت با استفاده از واکنش زنجیرهای پلی مراز

سابقه و هدف: تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونههای بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری بهندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیریها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روشهای تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از این مطالعه طراحی روش مولکولی PCR برای تشخیص سریع این ارگانیسمها میباشد. مواد و روشها: ژن bcsp که اختصاصی جنس بروسلا میباشد انتخاب و پرایمرهای اختصاصی آن به کمک نرمافزار Primer express v3/0 طراحی شد. برای تعیین ویژگی روش، ژنوم انواعی از باکتریهای کنترل منفی استفاده گردید. به منظور تعیین حساسیت و محاسبه حد تشخیص از کلونینگ محصولات PCR در پلاسمید pTZ57R/T استفاده شد. یافته ها: الکتروفورز محصول PCR ژن bcsp برای باکتریهای استاندارد B.abortus و B.melitensis باندی به اندازه 150 جفتباز نشان داد. آزمایشات PCR با استفاده از ژنوم باکتریهای کنترل منفی، هیچ باندی در ژل آگاروز ایجاد نکرد. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T به کمک واکنش زنجیرهای پلیمراز و توالییابی تایید شد. بحث و نتیجه گیری: پرایمر طراحی شده برای ژن اختصاصی جنس بروسلا در این روش میتواند با حساسیت تشخیص 1500 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم به کار رود و به این ترتیب هزینه و زمان مورد نیاز برای تشخیص را کاهش دهد.